生物毒性测试仪说明书

DXY-3型 智能化生物毒性(污染)测试仪使用说明书

一、仪器特点

DXY-3型 智能化生物毒性(污染)测试仪是在DXY-2型 生物毒性(污染)测试仪基础上改进，并加人智能化功能的新型号机，与国际上同类产品相当，但是，价格低廉，发光菌能保证供应。

该仪器是基于毒性物质对特殊的发光细菌的发光度的抑制作用而设计的，它通过测定发光细菌发光度的变化，量度被测环境样品中由重金属和其它有机污染物所造成的急性生物毒性。与传统的鱼、蚤和其它水生生物作为生物检测方法相比，发光细菌法简便、快速、灵敏、适应性强、重复性好、精度高、费用低、用途广，凡有毒化合物、废水、废弃物的生物毒性均可测定。因此，它是对受污染环境的生物毒性检测进行初筛、监测较为理想的工具，也是其他领域开拓新的实验测试方法的新工具。

该仪器可测量和显示待测液的毒性含量，测量所得数据可存储，可一次存储10组数据，每组数据包含3个标准液测量值和3个待检溶液的测量值，以便查看；同时，可以上传到计算机，以便分析和长期保存。仪器显示界面由液晶显示屏提供，仪器的控制输入由按键实现。

该仪器2型机为中国环境监测总站监制产品。

该仪器测定方法为国家标准，标准号：“GB/T15441-1995水质 急性毒性的测定 发光细菌法”由中国标准出版社出标准文版。仪器标准号：Ｑ_宁/KTS 01-93。经过近三十年的不断开发，已经在环境科学、微生物学、免疫学、细菌学、生物化学和临床检验等领域得到广泛应用。

二、仪器用途

测定纯化合物(包括有机分子、无机金属离子)的急性毒性。

测定受污染水体(包括工业排放污水、矿山采矿和冶炼废水、河水等水系)的急性毒性。

测定受污染土壤、河流和沿海带底泥的急性毒性。

用于研究有毒元素以及化合物相互之间的相互作用－协同或拮抗效应。

用于慢性反应的化学发光分析等。

三、测试原理

测试原理：总体急性生物毒性。

明亮发光杆菌之所以发光，是由于菌的发光系统发生了如下反应：

    基质

     ↓         ATP         ATP       ATP

还原型辅酶A → 黄素(H₂) → 细胞色素 → 0₂

               ↓

        载氢黄素单核苷酸

   荧光酶(电子)↓

               0₂          RCH0  RCO0H

电子 → FMNH₂ → 电子 → FMNH → 光＋FMN＋电子十H₂O

                        ↓

                        OOH

                       黑暗↓

             电子十黄素单核苷酸十H₂O₂

当细胞活性高，处于积极分裂状态时，细胞ATP含量高，发光强；休眠细胞ATP含量明显下降，发光弱；当细胞死亡，ATP立即消失，发光停止。

处于活性期的发光菌，当加入毒性物质(如重金属离子Cu^2＋/Cd^2＋/Se^4＋/Zn^2＋/As^3＋/Pb^2＋，农药五氧吩嗪、福美双，染料对氨基苯甲醚、对硝基邻甲苯胺，酸、碱等)，菌体就会受抑甚至死亡，体内ATP含量也会随之降低甚至消失，发光度便下降甚至到零。由于毒物浓度与菌体发光度呈线性负相关地变化，因而可据发光度确定毒物急性生物毒性。若此毒物知其成份而不知其浓度，则可根据先前测得的发光度——毒物浓度关系曲线(标准曲线)，测定浓度。

四、技术指标

1、菌种名称：明亮发光杆菌T₃小种                         急性生物毒性测定灵敏度比较

2、测试范围：0~1999mV(发光量)

3、测试精度：样品3次重复，相对偏差不大于15%

4、灵 敏 度：相当或优于鱼体96小时培养测定急性

生物毒性试验法，见表(列举几例)

5、显 著 性：样品浓度与发光细菌相对发光度P<0.05

工业废水或0.01的水平(纯化合物溶液)

6、测试温度：在室温20～25℃范围保持某一恒定值

7、测试时间：10～20min(单个样品)

8、结果表示：样品EC₅₀值(稀释百分浓度)或相对发光

度(%)及相当的氯化汞浓度值(mg/L)

9、供电电源：220V ±l0%

10、尺寸重量：300x240x130mm    5.5kg

该仪器外形、尺寸、重量，若有变化，恕不另行告知。

五、仪器操作

(一) 仪器样品室：仪器样品室为单管结构，可放入—只直径为20毫米的测试样品管(样品溶液为5毫升)；也可以预先放入塑料套管，用直径为12毫米的测试样品管(样品溶液为2毫升)。

(二) 样品溶液的制备、发光细菌的复苏以及测量顺序等：见附录。

(三) 仪器预热：在开始测试前，先确认暗室处于关闭状态（具体为暗室向右转至底）再接通仪器电源(这时面板上应是电源指示灯亮与停止指示灯亮)，让仪器预热—刻钟以上。

请注意！在接通电源前，—定要盖好样品室的盖子，避免光电倍增管曝光，而疲劳受损。

(四) 功能按键：

仪器控制由按键实现：[上/左]、[下/右]、[取消/返回]、[测量]、[存储]、[确定]。

仪器开机后进入主界面，主界面有5个功能选项：[测量]、[校正]、[设置]、[查看]、[上传]。

通过[上/左]、[下/右]选择要进入的功能选项，选中的功能反白显示，按[确定]后进入相应的菜单。

1、测量：

进入[测量]后，设置有两个选项：

①、使用默认操作员编号进入测量（编号全为1）；

②、使用手动输入，设置操作员编号，有三组操作员，通过[上/左]、[下/右]按键设置，按[确定]进入测量界面。

测量界面分三个部分：

①、*左边显示项目号、设置好的操作员编号、时间和日期；

②、上面显示测量值，右上脚显示温度；

③、中间显示测量结果，每屏显示两组测量结果；

下面显示菜单，共四个菜单：[测量]、[上翻]、[下翻]、[返回]主界面。

[测量]  菜单是用于记录和修改已记录的稳定的测量值的。当菜单处于[测量]时，按[确定]键，会将测量值记录下来，并在屏幕中间显示出来；按[取消]键，会将*后记录的一个数据清除，重新测量；按[上翻]、[下翻]查看已记录的数据。一个项目包含10组数据，每屏只能显示2组数据。

测量完毕后如果需要保存数据的话，请按[储存]键，屏幕会给出一个界面用于选择是否保存当前项目所测数据，保存是请您记住系统自动递增，生成的项目编号，以便你查阅数据。

注意：测量时记录的数据只是缓存，没有存入ROM当中，如果测量完毕后的数据需要存储的话，请务必按[存储]键将数据保存。

2、校正：

进入[校正]后，有三个功能菜单：[零点校正]、[时间校正]、[返回]主界面。

通过[上/左]、[下/右]、[确定]、[取消/返回]按键进行具体操作，反白显示的为当前选中的操作。

3、设置：

进入[设置]后，有五个功能菜单：[背光保持时间]、[声音设置]、[倍率] 、[自动取样时间]、[返回]主界面。

[背光保持时间]包括：15S、30S、60S、常亮；

[声音设置]包括：开和关提示音；

[倍率]包括：*1、*2、*3、*4、*5  以此放大发光菌的发光量。

[自动取样时间]包括：5S、10S、15S、手动；

选择[自动取样时间]后，在测量时，到达设定的时间后，会自动记录测量结果。

4、查看：

进入[查看]后，会提示输入项目号(左上脚显示的项目号)，输入项目号后就会进入界面，可以查看当时测量后保存的数据，界面跟测量界面相同，显示此项目测量的时间、日期、温度、操作员编号、测量的数据，通过[上/左]、[下/右]按键上翻、下翻数据。按[返回]键退出查看，返回主界面。

5、上传：

进入[上传]后，会提示单一上传或者选择整片上传，将ROM里面的数据全部上传。

(五) 样品测量：

1、向上拔出样品室的盖子(注意！拔出前，面板上应是停止指示灯亮)，然后将盛有待测样品溶液的瓶子放入样品室，盖好盖子。

2、抓住盖子，依逆时针方向旋转(这时面板上停止指示灯熄灭，测量指示灯亮)，约1-2秒，则可读取样品溶液的测定数据。

3、抓住盖子按顺时针方向旋转，回到原处(面板上测量指示灯熄灭，停止指示灯亮)，这时，才可以向上拔出盖子，取出已测过的样品。此后，可作如下处理：

①、还有待测样品，再取一瓶放入，盖好盖子，然后按上述步骤进行测量。

②、因样品需要进一步处理，不能马上测量，可以盖上盖子等待。

③、整批样品已测试完毕，盖好盖子，将仪器电源切断。

(六) 有色样品液的测量：

对有色被测液，若用常规方法测会有干扰，因此需用下述方法进行校正。具体步骤如下：

1、从仪器样品室取出黑色塑料管套。

2、取一只2m1管(即12毫米测试样品管)，加3% NaCI溶液2ml，将该管放进一只装有适量3% NaCl溶液的5ml管(即20毫米的测试样品管)内，并使外管与内管的3% NaCl溶液面平齐，此作CK管。

3、另取一只2ml管，加3% NaCl溶液2ml，放入另一只装有适量有色待测样品液的5ml管内，要使外管与内管的3% NaCl溶液面平齐，此作CKc管。

4、于CK和CKc二管的内管中同时加复苏发光菌液10μ(注意：必须是本批样品测定所用同一瓶复苏菌液)，立即记时到秒，等反应满15分钟，迅即放入仪器样品室，测定二只带有内管的5ml管的发光度。分别记下发光度L₁(CK管)和L₂(CKc管)。

5、计算因颜色引起的发光度校正值△L＝L_l-L₂。

6、测试带色样品管及其CK管(加3% NaCl溶液)的发光量。

但是，所有CK管测得之发光度均须减去校正值△L后才能作为CK发光度。

六、结果处理

数据的处理：见附一中之(五)测试数据处理

说明：当在一次系列样品的测量过程中，“输出幅度选择”开关所处的位置有变动，则需换算成某—档次的值，然后才进行数据处理。“Xl”档与其它档(“XN”档)的关系如下：

                X_N

          X_l ＝ ---- 或 X_N ＝ X_l·N                N

式中：N--------为“输出幅度选择”开关所处的位置；

          X₁ ，X_N --为“输出幅度选择”开关处于“Xl”，“XN”档时，数字表上的读数。

七、分级标准

根据国外有关资料及国内的一些实验数据，拟定如下水质急性毒性的分级标准，供参考。

水质急性毒性的分级标准

注：相对抑光率% ＝ **** － 相对发光度%

八、注意事项

(一) 仪器要水平放置于工作台上，并注意，千万不要放置在温度高、湿度大及电磁干扰大的地方。

(二) 当仪器不进行测试时，—定要盖上样品室的盖子，防止灰尘进入及光电倍增管曝光；在测量时，要避免以强光照射光电倍增管，而产生疲劳现象。

(三) 在给各测试管加复苏菌液后，盖上瓶塞，用手颠倒5次；但是，在放回原位后，要拔去瓶塞！！！

(四) 请特别注意：严防测试的样品溶液漏在样品室内。如发现样品管外壁已附着样品液时，一定要先擦干净后，再放入样品室，避免样品室产生锈蚀，致旋转不自如或转不动。若样品室内已沾附着样品液时，马上用滤纸吸干，并用稀机油在沾附处擦洗—下。

(五) 发光细菌的活性及使用菌液量的准确性都将对测量产生很大的影响，因此务必正确的操作。

(六) 当发现测量结果异常时，要认真检查分析，找出原因，并加以解决：

1、操作的环境温度、样品温度是否控制在20⁰C；

2、菌种的复苏情况，是否均匀；

3、用于测试的管子是否清洗干净；

4、用10μl微量注射器吸取复苏菌液时是否有小气泡；

5、样品与菌液的反应时间是否准确到秒；

6、当天使用的菌种复苏液只能在当天使用。

(七) 请注意：

1、仪器处于“停”状态，旋转“调零”，数字表上能出现正负值均匀变化，调节“调零”使显示“0”，零点应稳定；

转动样品室的盖子，让仪器处于“测”状态，然后慢慢拔起盖子，使它与样品室间有一小缝，让室内光线射入样品室，数字表有显示值，且随隙缝大小而变化。盖好盖子，转回原位，应显“0”。

2、发光菌液在仪器中的显示值符合规定要求，衰减情况正常。

以上两项正常，出现测量结果异常，则属于操作不严格、不规范，要认真重做一遍。

(八) 如果发光细菌不好，则更换发光菌冻干粉。当判定是仪器的故障，请发送我所检修，千万不要自拆。

(九) 仪器自提货之日起，因元器件的质量造成的故障，免费包修一年；该仪器长年保修。

山东恒美电子科技有限公司